PCR檢測微量感染因子(zǐ)時(shí)，容易因爲(wéi / wèi)污染的(de)而(ér)導緻各種問題，因此，進行PCR操作時(shí)，操作人(rén)員應該嚴格遵守一(yī / yì ／yí)些操作規程，最大(dà)程度地(dì / de)降低可能出(chū)現的(de)PCR污染或杜絕污染的(de)出(chū)現。
（1）劃分操作區：目前，普通PCR尚不(bù)能做到(dào)單人(rén)單管，實現完全閉管操作，但無論是(shì)否能夠達到(dào)單人(rén)單管，均要(yào / yāo)求實驗操作在(zài)三個(gè)不(bù)同的(de)區域内進行，PCR的(de)前處理和(hé / huò)後處理要(yào / yāo)在(zài)不(bù)同的(de)隔離區内進行：
① 标本處理區，包括擴增摸闆的(de)制備；
② PCR擴增區，包括反應液的(de)配制和(hé / huò)PCR擴增；
③ 産物分析區，凝膠電泳分析，産物拍照及重組克隆的(de)制備。
各工作區要(yào / yāo)有一(yī / yì ／yí)定的(de)隔離，操作器材專用，要(yào / yāo)有一(yī / yì ／yí)定的(de)方向性。如：标本制備→PCR擴增→産物分析→産物處理。
切記：産物分析區的(de)産物及器材不(bù)要(yào / yāo)拿到(dào)其他(tā)兩個(gè)工作區。
（2）分裝試劑：PCR擴增所需要(yào / yāo)的(de)試劑均應在(zài)裝有紫外燈的(de)超淨工作台或負壓工作台配制和(hé / huò)分裝。所有的(de)加樣器和(hé / huò)吸頭需固定放于(yú)其中，不(bù)能用來(lái)吸取擴增後的(de)DNA和(hé / huò)其他(tā)來(lái)源的(de)DNA：
① PCR用水應爲(wéi / wèi)高壓的(de)雙蒸水；
② 引物和(hé / huò)dNTP用高壓的(de)雙蒸水在(zài)無PCR擴增産物區配制；
③ 引物和(hé / huò)dNTP應分裝儲存，分裝時(shí)應标明時(shí)間，以(yǐ)備發生污染時(shí)查找原因。
(3) 實驗操作注意事項 盡管擴增序列的(de)殘留污染大(dà)部分是(shì)假陽性反應的(de)原因，樣品間的(de)交叉污染也(yě)是(shì)原因之(zhī)一(yī / yì ／yí)。因此，不(bù)僅要(yào / yāo)在(zài)進行擴增反應是(shì)謹慎認真，在(zài)樣品的(de)收集、抽提和(hé / huò)擴增的(de)所有環節都
應該注意：
① 戴一(yī / yì ／yí)次性手套，若不(bù)小心濺上(shàng)反應液，立即更換手套；
② 使用一(yī / yì ／yí)次性吸頭，嚴禁與PCR産物分析室的(de)吸頭混用，吸頭不(bù)要(yào / yāo)長時(shí)間暴露于(yú)空氣中，避免氣溶膠的(de)污染；
③ 避免反應液飛濺，打開反應管時(shí)爲(wéi / wèi)避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體于(yú)管底。若不(bù)小心濺到(dào)手套或桌面上(shàng)，應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；
④ 操作多份樣品時(shí)，制備反應混合液，先将dNTP、緩沖液、引物和(hé / huò)酶混合好，然後分裝，這(zhè)樣即可以(yǐ)減少操作，避免污染，又可以(yǐ)增加反應的(de)精确度；
⑤ 最後加入反應模闆，加入後蓋緊反應管；
⑥ 操作時(shí)設立陰陽性對照和(hé / huò)空白對照，即可驗證PCR反應的(de)可靠性，又可以(yǐ)協助判斷擴增系統的(de)可信性；
⑦ 盡可能用可替換或可高壓處理的(de)加樣器，由于(yú)加樣器最容易受産物氣溶膠或标本DNA的(de)污染，最好使用可替換或高壓處理的(de)加樣器。如沒有這(zhè)種特殊的(de)加樣器，至少PCR操作過程中加樣器應該專用，不(bù)能交叉使用，尤其是(shì)PCR産物分析所用加樣器不(bù)能拿到(dào)其它兩個(gè)區；
⑧ 重複實驗，驗證結果，慎下結論。