國(guó)産vs進口，熒光定量PCR預混液真實測評
發布時(shí)間：2019.11.14
2款國(guó)際大(dà)牌，3款國(guó)内品牌，共5款探針法熒光定量PCR預混液，擴增效率與特異性真實測評。
實時(shí)熒光定量PCR（real-time qPCR）實驗在(zài)分子(zǐ)生物學研究中越來(lái)越普遍。現在(zài)常用兩種熒光定量方法：SYBR Green I嵌合熒光染料法，和(hé / huò)TaqMan探針法。染料法成本較低，使用方便，是(shì)最常用的(de)熒光定量方法；探針法成本較高，但是(shì)定量結果更準确。
挑選一(yī / yì ／yí)款質量好的(de)擴增産品對于(yú)實驗結果有至關重要(yào / yāo)的(de)作用。新手們對于(yú)如何判斷一(yī / yì ／yí)款qPCR預混液的(de)好壞有點迷茫，常常會出(chū)現一(yī / yì ／yí)個(gè)誤區：擴增效率越高越好。
爲(wéi / wèi)什麽不(bù)是(shì)效率越高越好？産物的(de)特異性怎麽判斷？國(guó)産品牌和(hé / huò)進口品牌的(de)差距在(zài)哪裏？通過下面的(de)實驗就(jiù)可以(yǐ)看出(chū)來(lái)。
5種品牌的(de)TaqMan探針法熒光定量PCR預混液，同時(shí)用相同的(de)模闆DNA和(hé / huò)引物進行擴增。擴增曲線如下：
可以(yǐ)看出(chū)擴增曲線都正常，除了(le／liǎo)國(guó)産品牌C的(de)Ct值較大(dà)，即擴增效率較低外，其餘4個(gè)品牌的(de)Ct值均接近。但是(shì)它們真實地(dì / de)反映了(le／liǎo)目标産物的(de)實時(shí)擴增情況嗎？
我們對以(yǐ)上(shàng)qPCR産物進行瓊脂糖凝膠電泳，根據産物大(dà)小可以(yǐ)直觀地(dì / de)判斷其特異性：
品牌A和(hé / huò)品牌D的(de)産物存在(zài)明顯的(de)非特異性擴增；品牌C的(de)産物大(dà)小不(bù)正确，完全是(shì)非特異性擴增；東盛生物（一(yī / yì ／yí)款探針法和(hé / huò)兩款染料法）和(hé / huò)品牌B的(de)産物是(shì)特異的(de)。
通過對比我們發現，擴增效率不(bù)是(shì)越高越好，産物特異才是(shì)最重要(yào / yāo)的(de)！
首次使用的(de)引物，不(bù)論是(shì)進行染料法定量的(de)，還是(shì)探針法定量的(de)，都建議通過DNA電泳來(lái)直觀判斷其特異性。當然，染料法定量的(de)特異性也(yě)可以(yǐ)借助熔解曲線來(lái)判斷。
以(yǐ)上(shàng)隻是(shì)我們對比測評的(de)一(yī / yì ／yí)組結果，綜合多次、多品牌、多類型的(de)對比結果，從整體水平來(lái)看，進口大(dà)牌的(de)qPCR預混液比國(guó)産品牌質量更可靠，但也(yě)不(bù)是(shì)全部都表現很好。
東盛生物qPCR Mix不(bù)斷優化升級，與衆多國(guó)際品牌對比均表現突出(chū)。
東盛生物熒光定量PCR預混液核心成分爲(wéi / wèi)類抗體技術修飾的(de)熱啓動酶，完美平衡了(le／liǎo)特異性與擴增效率。
特異性過高會抑制擴增效率，擴增效率過高會降低特異性，因此保持特異性和(hé / huò)擴增效率在(zài)一(yī / yì ／yí)個(gè)平衡的(de)位置是(shì)qPCR Mix的(de)技術難題。
東盛生物擁有超過十年的(de)PCR技術研發經驗，經過反複嘗試，不(bù)斷優化，得到(dào)了(le／liǎo)兼顧特異性與擴增效率的(de)qPCR Mix。
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公司産品線以(yǐ)PCR技術爲(wéi / wèi)核心，聚焦于(yú)普通PCR、qPCR、多重PCR，DNA電泳以(yǐ)及核酸純化等分子(zǐ)生物學技術。産品主要(yào / yāo)應用于(yú)基礎生命科學研究。
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